色譜柱使用的一般注意事項

更新時間：2023-08-15 點擊次數：972

1. 色譜柱各部分名稱

2. 色譜柱的安裝

(1) 安裝色譜柱前請先將設備中的流路充分洗凈，置換成流動相。另外，請切換閥清洗并置換進樣器的流路（進樣環）。置換不互溶或溶解性低的溶劑時，先使置換為雙方溶劑都能互溶的溶劑，再置換成使用溶劑。
（例1）從氯仿置換成水的時候，先置換為甲醇，再置換成水。
（例2）從高濃度緩沖溶液（或鹽的水溶液）置換成水/乙腈的時候，先置換為水，再置換成水/乙腈。

注意	色譜柱不能使用的溶劑在流路中殘留可能會造成色譜柱的劣化。
注意	流動相組成發生顯著變化，可能造成泵、管路中的污垢脫落，可能會造成色譜柱的劣化。

(2) 查看色譜柱身標簽，然后將色譜柱連接到設備，使流動相沿流動方向（?）流動。使用保護柱時，請依次先連接保護柱，再連接分析柱。
(3) 請一邊按住管路一邊擰緊色譜柱的末端接頭，防止管路和末端接頭中產生空隙?？障稌斐蓸悠返臄U散，導致色譜峰變寬。
(4) 將流速設置為小于正常流速的一半，然后開始送液。在升溫使用色譜柱時，以低流送液直到達到設定溫度，然后逐漸將流速增加到所需流速。

警告	請檢查溶劑是否泄露。否則可能會造成漏電、腐蝕或化學損壞。

注意	色譜柱連接入設備時，請注意不要使氣泡進入色譜柱，否則可能造成色譜柱劣化。
注意	當連接色譜柱或從停止送液的狀態開始送液時，以小于正常流速一半的流速送液，壓力突然升高可能會使色譜柱劣化。
注意	升溫使用色譜柱后，將流速降低至正常流速的一半以下并繼續送液，柱溫恢復至室溫，然后停泵。否則洗脫液冷卻時發生收縮，在色譜柱內形成空隙可能導致色譜柱劣化。

3. 樣品配制

(1) 盡量使用流動相溶解和稀釋樣品。如果難以溶解在流動相中，請盡量和流動相組成接近。對于梯度洗脫，建議使用初始流動相配制樣品。
(2) 為了防止由于顆粒物（不溶物）的堵塞導致色譜柱變差，劣化或性能變差，請使用濾膜（0.45μm）過濾樣品。
(3) 為了保護分析柱，建議使用保護柱。

參考	保護柱可保持分析柱的性能，并沒有提高分離性能的作用。

4. 流動相配制

(1) 流動相請充分脫氣防止有氣泡。
(2) 流動相中含有不溶的雜質可能會導致色譜柱性能下降和色譜圖噪聲，因此請使用濾膜（0.45μm）過濾流動相。
(3) 確認色譜柱的儲存溶劑，置換不互溶或溶解性低的溶劑時，先置換成雙方溶劑都能互溶的溶劑，再置換成使用溶劑。
(4) 置換流動相時，請使用通常流速一半以下的流速送液。
(5) 進行梯度洗脫時，由于流動相組成的變化，色譜柱壓力可能會超過梯度洗脫過程中的最大使用壓力。請調整流速和色譜柱溫度，以免超出最大使用壓力。

注意	使用水時，請使用超純水裝置新配制的水或者剛開封的HPLC級蒸餾水。使用有機溶劑時，請使用HPLC級以上的試劑，開封長時間的有機溶劑可能有性質改變、吸濕、污染的問題，請不要使用。
注意	請勿使用已長時間保存的流動相，組成的變化可能導致洗脫行為的變化和色譜柱的劣化。
注意	如果使用腐蝕性較強的鹽（例如氯化鈉），請在分析后將其洗凈，以免鹽殘留在設備或色譜柱上，設備和色譜柱可能會生銹。

參考	建議使用在線脫氣機。
參考	請設置泵的報警壓力，以避免超過最大可用壓力。

5. 色譜柱清洗方法

流路或者樣品中有不溶物質或者吸附性物質殘留在色譜柱內，可能會影響色譜柱的洗脫及壓力的變化，這種情況清洗色譜柱可能有改善效果。使用保護柱時，請先去除保護柱進行檢測，如果效果改善了，則可能是保護柱的原因，請清洗保護柱。
如果去除了保護柱仍然沒有改善，請分別清洗保護柱和分析柱，請注意把保護柱和分析柱分開清洗。清洗色譜柱時，請不要連接檢測器，流動相從色譜柱流出后直接流入廢液缸即可。

(1) 如果不溶物堵在色譜柱入口，可以逆接色譜柱并以小于正常流速一半的流速通流動相來將其除去。
(2) 其他的清洗方法請參考各產品的使用說明書。

6. 色譜柱的保存

置換成出廠時的儲存溶劑，從裝置中卸下色譜柱并擰緊兩端堵頭，在溫度變化小的陰暗處儲存。

注意	色譜柱內絕對不能干燥，否則可能導致色譜柱劣化。

7. 色譜柱的檢定方法

檢定條件請參考各產品包裝盒中的出廠報告(Certificate of Analysis)。理論塔板數(N)和不對稱系數(Fas)請通過如下方法計算。

8. 色譜柱的廢棄方法

通常實驗中使用的色譜柱應根據當地政府的規定，作為工業廢棄物進行處置。

9. 其它注意事項

(1) 請勿擰開色譜柱的末端螺絲。
(2) 請勿對色譜柱施加敲擊，掉落等強烈沖擊。

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